Plásmido CRISPR de Activación (h) c-Rel: sc-400478-ACT

REL codifica c-Rel, un miembro de la familia NF-κB de factores de transcripción que regula programas de expresión génica inducible que controlan la activación inmunitaria, la inflamación, la supervivencia celular y la proliferación. c-Rel participa en la señalización canónica de NF-κB aguas abajo de receptores como el receptor de células T, el receptor de células B, el receptor de TNF y los receptores tipo Toll, coordinando respuestas transcripcionales a citocinas y estímulos microbianos. La actividad desregulada de REL se ha vinculado con una diferenciación alterada de los linfocitos y una producción anómala de citocinas, y se estudia con frecuencia en el contexto de patologías mediadas por el sistema inmunitario y de la señalización oncogénica de NF-κB. Como efector nuclear de estas vías, c-Rel se investiga habitualmente por sus funciones en la reconfiguración de redes transcripcionales, las respuestas al estrés y el control dependiente del contexto de la apoptosis.

c-Rel El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de REL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-Rel El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus REL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional REL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-Rel. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo REL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-Rel en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-Rel en células tumorales con expresión de REL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.