Plásmido CRISPR de Activación (m) c-Jun: sc-421207-ACT

Jun codifica el factor de transcripción c-Jun, un componente central del complejo AP-1 que integra señales de la vía MAPK para controlar la expresión génica sensible a estímulos. c-Jun regula programas implicados en la progresión del ciclo celular, la apoptosis, la diferenciación y las respuestas inflamatorias mediante la unión cooperativa con proteínas de la familia FOS en sitios AP-1. En sistemas de ratón, la actividad de JUN/AP-1 se utiliza ampliamente como indicador de señalización por estrés y citocinas, conectando vías aguas arriba como JNK, ERK y p38 con la remodelación transcripcional aguas abajo. La desregulación de la señalización de c-Jun se asocia con la transformación oncogénica, la remodelación tisular y la patología mediada por el sistema inmunitario, lo que convierte a Jun en un nodo frecuente para estudios mecanísticos del acoplamiento entre señalización y transcripción.

c-Jun El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Jun sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-Jun El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Jun en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Jun, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-Jun. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Jun y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-Jun en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-Jun en células tumorales con expresión de Jun silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.