c-Fos Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400009-ACT

FOS codifica c-Fos, um fator de transcrição de resposta imediata (immediate-early) que responde rapidamente a estímulos extracelulares, como fatores de crescimento, citocinas e atividade neuronal. Como componente central do complexo AP-1, c-Fos dimeriza com proteínas da família JUN para regular programas que controlam proliferação, diferenciação, apoptose e respostas ao estresse a jusante das vias de sinalização MAPK/ERK, JNK e p38. A transcrição dependente de c-Fos influencia vias inflamatórias e imunes e integra sinais mediados por cálcio e por quinases em diversos tipos celulares. A desregulação da expressão de FOS ou da atividade de AP-1 está associada à transformação oncogênica, invasão e resistência a terapias, e também é implicada em fenótipos relacionados à neuroplasticidade e em mecanismos de doenças inflamatórias.

c-Fos O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Fos O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Fos. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Fos no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Fos em células tumorais com expressão de FOS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.