Plásmido CRISPR de Activación (m) C/EBP δ: sc-419624-ACT

Cebpd codifica el factor de transcripción C/EBP delta (CEBPδ), miembro de la familia de proteínas de unión a CCAAT/enhancer, que coordina programas de expresión génica sensibles a estímulos en los compartimentos inmunitario y estromal. En células de ratón, C/EBPδ se induce rápidamente por señales inflamatorias y estrés celular, integrando la señalización de vías impulsadas por citocinas y redes transcripcionales posteriores para regular la diferenciación, las respuestas de fase aguda y el control del ciclo celular. A través de sus dominios de unión al ADN y de transactivación, C/EBPδ configura potenciadores con cromatina accesible y modula genes implicados en la inmunidad innata, el metabolismo y la remodelación tisular. La actividad desregulada de Cebpd se ha asociado con la patobiología inflamatoria y con estados proliferativos alterados, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de circuitos transcripcionales de respuesta al estrés.

C/EBP δ El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cebpd sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C/EBP δ El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cebpd en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cebpd, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C/EBP δ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cebpd y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C/EBP δ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C/EBP δ en células tumorales con expresión de Cebpd silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.