Plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (h): sc-400195

Présentation

CEBPA code le facteur de transcription C/EBPα, une protéine de type « basic leucine zipper » qui se fixe sur des éléments CCAAT/enhancer afin de coordonner des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Il s’agit d’un régulateur majeur de la différenciation hématopoïétique et myéloïde, intégrant les signaux avec un contrôle transcriptionnel de l’arrêt du cycle cellulaire, de l’homéostasie métabolique et de la maturation granulocytaire. C/EBPα interagit avec des voies impliquées dans le remodelage de la chromatine et avec des réseaux transcriptionnels faisant intervenir la signalisation des cytokines et d’autres régulateurs myéloïdes, façonnant ainsi le développement de l’immunité innée. La dérégulation de l’expression ou de la fonction de CEBPA est associée à des états de différenciation altérés et à des phénotypes prolifératifs, ce qui en fait une cible largement étudiée, notamment dans la biologie des hémopathies malignes et les décisions de destinée des cellules souches/progénitrices.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C/EBP α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CEBPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CEBPA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CEBPA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C/EBP α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CEBPA pour l'étude de la signalisation de C/EBP α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CEBPA essentiels à la fonction de C/EBP α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CEBPA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C/EBP α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C/EBP α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CEBPA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C/EBP α plasmide HDR (h) et le C/EBP α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CEBPA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CEBPA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.