BVES CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403698

Übersicht

Blood vessel epicardial substance (BVES), auch bekannt als POPDC1, ist ein membranassoziiertes Protein, das in quergestreifter Muskulatur und epithelialen Geweben angereichert ist und zur Zell-Zell-Adhäsion sowie zur epithelialen Polarität beiträgt. BVES ist an Signalnetzwerken beteiligt, die mit cAMP-Bindung, Membrantransport und der Organisation des Zytoskeletts verknüpft sind, und hilft so, die Integrität von Zellkontakten und die Gewebearchitektur zu koordinieren. Eine veränderte BVES-Expression oder -Lokalisierung wurde mit gestörter Barrierefunktion und aberranter Zellmigration in Zusammenhang gebracht, was es für Untersuchungen epithelial-mesenchymaler Transitionen und des Gewebeumbaus relevant macht. In der Krebsbiologie und der kardiovaskulären Forschung wird BVES häufig im Hinblick auf seine Rollen bei der Aufrechterhaltung der normalen zellulären Organisation und in Signalwegen untersucht, die Proliferation und Motilität beeinflussen.

Das BVES CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BVES-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BVES-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BVES nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BVES-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BVES-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BVES-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BVES-Exone abzielen, die für die BVES-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BVES-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BVES CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BVES CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BVES-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BVES HDR-Plasmid (h) und BVES HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BVES-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BVES-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.