Plásmido CRISPR de Activación (h) BVES: sc-403698-ACT

BVES (sustancia epicárdica de los vasos sanguíneos), también conocido como POPDC1, codifica una proteína asociada a la membrana, enriquecida en tejidos cardíacos y epiteliales, que actúa como regulador de la adhesión célula–célula y del tráfico de membrana mediante su unión a AMPc. BVES participa en la organización de las uniones celulares y en la remodelación del citoesqueleto, influyendo en la integridad epitelial, la migración y los fenotipos de conducción eléctrica en el músculo estriado. A través de la modulación de la señalización dependiente de AMPc y de interacciones de andamiaje asociadas, BVES contribuye a la homeostasis tisular y a las respuestas al estrés. La alteración de la expresión o la localización de BVES se ha vinculado con defectos en la función de barrera epitelial y con fenotipos relacionados con la conducción cardíaca, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de vías asociadas a cardiomiopatía y a la desregulación epitelial.

BVES El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BVES sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BVES El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BVES en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BVES, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BVES. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BVES y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BVES en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BVES en células tumorales con expresión de BVES silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.