Plásmido CRISPR de Activación (h) BUB1: sc-402006-ACT

BUB1 codifica una quinasa de serina/treonina que actúa como componente central del punto de control de ensamblaje del huso, coordinando la alineación y segregación correctas de los cromosomas durante la mitosis. Se localiza en los cinetocoros y ayuda a reclutar y regular proteínas del checkpoint, incluidas BUB3, MAD1/2 y CDC20, para controlar el inicio de la anafase y mantener la estabilidad genómica. A través de sus funciones en la unión cinetocoro–microtúbulo y en la señalización del checkpoint, BUB1 vincula la temporización mitótica con vías de corrección de errores que previenen la aneuploidía. La expresión o actividad desregulada de BUB1 se ha asociado con fenotipos de inestabilidad cromosómica observados en diversos modelos de cáncer, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control mitótico, la proliferación y los mecanismos de mantenimiento del genoma.

BUB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BUB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BUB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BUB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BUB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BUB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BUB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BUB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BUB1 en células tumorales con expresión de BUB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.