BTLA CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431543-ACT

Btla kodiert den B- und T‑Lymphozyten‑Attenuator (BTLA), einen inhibitorischen Immunrezeptor aus der CD28‑Familie, der die Aktivierung von Lymphozyten dämpft und zur Aufrechterhaltung der peripheren Toleranz beiträgt. Die BTLA‑Signalgebung wird durch die Bindung an HVEM (TNFRSF14) ausgelöst und rekrutiert über ITIM/ITSM‑Motive Phosphatasen, um die antigenrezeptornahe Signalweiterleitung abzuschwächen; dadurch werden Zytokinproduktion, Proliferation und Effektor‑Differenzierung begrenzt. In Immunzellen der Maus trägt BTLA zur Regulation von T‑Zell‑Erschöpfungs‑ähnlichen Programmen, Keimzentrumsreaktionen und zur Kontrolle entzündlicher Signale innerhalb lymphoider Gewebe bei. Fehlregulierte BTLA‑Signalwege sind für Untersuchungen zu Autoimmunität, chronischer Entzündung, infektionsgetriebenem Immun‑Remodeling und Tumorimmunologie im Kontext der Immuncheckpoint‑Biologie breit relevant.

BTLA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Btla-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTLA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Btla-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Btla-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTLA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Btla-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTLA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTLA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Btla-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.