Plásmido Doble Nickase (m) BTEB1: sc-421299-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)BTEB1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BTEB1 (m) y el plásmido de doble nickasa BTEB1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Klf9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BTEB1 Anticuerpo (A-5): sc-376422
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) BTEB1 | sc-421299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) BTEB1 | sc-421299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Klf9 codifica BTEB1 (factor tipo Krüppel 9), un factor de transcripción con dedos de zinc C2H2 que se une a elementos promotores ricos en GC para regular programas de expresión génica dependientes del contexto. En células de ratón, BTEB1 integra señales de vías hormonales nucleares y de respuesta al estrés para modular la diferenciación, el control del ciclo celular y la homeostasis metabólica, a menudo mediante interacciones con redes transcripcionales Sp/KLF y reguladores de la cromatina. La actividad de Klf9 se ha relacionado con la maduración neuronal, la transcripción sensible a señales endocrinas y procesos de remodelación tisular, lo que lo hace relevante para estudios de biología del desarrollo y de reprogramación transcripcional dependiente de estímulos. La expresión desregulada de Klf9/BTEB1 se ha asociado con estados alterados de proliferación y diferenciación en modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo para la investigación mecanística de vías.
BTEB1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Klf9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Klf9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Klf9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Klf9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.