Plásmido CRISPR de Activación (m) BTEB1: sc-421299-ACT

El gen murino **Klf9** codifica el factor de transcripción **BTEB1** (factor similar a Krüppel 9), una proteína de unión al ADN con dedos de zinc que modula la actividad de promotores en respuesta a señales del desarrollo y hormonales. BTEB1 integra la señalización de vías de receptores nucleares, incluidos los programas de glucocorticoides y hormona tiroidea, para moldear redes génicas que controlan la maduración neuronal, la diferenciación celular y la transcripción adaptativa al estrés. También se ha vinculado a la regulación de puntos de control del ciclo celular, las respuestas al estrés oxidativo y la homeostasis metabólica mediante activación y represión transcripcional dependientes del contexto. La actividad desregulada de Klf9/BTEB1 se ha asociado con alteraciones de la función neuroendocrina y con estados transcripcionales relevantes para la inflamación, la fibrosis y la remodelación oncogénica, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de circuitos de regulación génica.

BTEB1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Klf9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTEB1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Klf9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Klf9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTEB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Klf9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTEB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTEB1 en células tumorales con expresión de Klf9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.