BTC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401927-ACT

O BTC humano codifica a betacelulina, um ligante da família do fator de crescimento epidérmico (EGF) que é sintetizado como um precursor ancorado à membrana e liberado por clivagem proteolítica para sinalizar em contextos autócrinos e parácrinos. O BTC ativa receptores EGFR/ERBB, acionando as vias de sinalização MAPK/ERK e PI3K/AKT a jusante, modulando proliferação, sobrevivência e migração celulares, bem como interações epiteliais–mesenquimais. Sua expressão é regulada durante remodelamento tecidual e sinalização inflamatória, e tem sido associada a alterações nos circuitos de fatores de crescimento na biologia do câncer e em contextos cardiometabólicos e endócrinos relevantes, incluindo a função das ilhotas pancreáticas. Como fator de crescimento secretado/ancorado à membrana, o BTC é frequentemente utilizado para estudar a dinâmica receptor–ligante, programas transcricionais e o crosstalk entre vias que influenciam transições de estado celular.

BTC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BTC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BTC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BTC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BTC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTC em células tumorais com expressão de BTC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.