Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide Double Nickase (h) BSEP: sc-400742-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BSEP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BSEP Double Nickase (h) et le plasmide BSEP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABCB11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BSEP Antibody (F-6): sc-74500
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BSEP | sc-400742-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BSEP | sc-400742-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCB11 code la pompe d’export des sels biliaires (BSEP), un transporteur canaliculaire de la famille ABC (ATP-binding cassette) qui assure, de manière dépendante de l’ATP, l’efflux des acides biliaires des hépatocytes vers la bile. L’activité de BSEP est essentielle à la circulation entérohépatique et à l’homéostasie hépatique des acides biliaires, en coordination avec leur synthèse, leur conjugaison et des voies de signalisation telles que le rétrocontrôle régulé par FXR. Une altération de la fonction d’ABCB11 modifie la composition des acides biliaires et leur accumulation intracellulaire, perturbant l’intégrité membranaire, les réponses au stress oxydatif et la signalisation inflammatoire dans les systèmes hépatobiliaires. Les variations génétiques ou la diminution de l’expression d’ABCB11 sont associées à des phénotypes cholestatiques et offrent un point d’entrée mécanistique pour étudier la biologie des transporteurs et la pathologie hépatique induite par les acides biliaires.
BSEP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCB11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCB11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCB11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCB11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.