Partículas Lentivirales de Activación (m) BRWD1: sc-430062-LAC

El gen murino Brwd1 codifica BRWD1, una proteína asociada a la cromatina que contiene un bromodominio y repeticiones WD, y que actúa como regulador epigenético de la transcripción mediante el reconocimiento de histonas acetiladas y la coordinación de complejos de remodelación de la cromatina. BRWD1 se ha implicado en programas de expresión génica específicos de linaje, particularmente en contextos hematopoyéticos y de células germinales, donde favorece las decisiones de destino celular y el control transcripcional asociado a la diferenciación. Por sus funciones en la organización de la cromatina y la regulación de la transcripción, BRWD1 es relevante para estudios sobre el control de la proliferación, la regulación del genoma y los mecanismos que pueden contribuir a estados de expresión génica desregulada asociados con fenotipos oncogénicos y del desarrollo. Estas propiedades hacen de Brwd1 un objetivo útil para investigar vías dependientes de la cromatina, redes transcripcionales y transiciones de estado celular en sistemas modelo de ratón.

Las partículas de activación lentiviral BRWD1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Brwd1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BRWD1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Brwd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BRWD1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Brwd1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.