Plásmido CRISPR de Activación (h) Brn-3c/BRN3C/POU4F3: sc-401701-ACT

POU4F3 (Brn-3c/BRN3C) es un factor de transcripción con dominio POU que regula programas de expresión génica necesarios para la diferenciación y el mantenimiento de células sensoriales, con funciones bien caracterizadas en el desarrollo de las células ciliadas del oído interno y en la especificación de linajes neuronales. Al unirse a motivos de ADN tipo octámero, BRN3C coordina redes transcripcionales que se intersectan con la señalización del desarrollo y el control de la identidad celular mediado por la cromatina. La actividad o expresión alterada de POU4F3 se ha vinculado a la hipoacusia hereditaria y se estudia con frecuencia en el contexto de la supervivencia de las células ciliadas, las respuestas al estrés y la degeneración. Estas propiedades hacen de POU4F3 un marcador útil y un nodo mecanístico para analizar la regulación transcripcional en la neurobiología sensorial.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POU4F3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Brn-3c/BRN3C/POU4F3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POU4F3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POU4F3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Brn-3c/BRN3C/POU4F3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POU4F3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Brn-3c/BRN3C/POU4F3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Brn-3c/BRN3C/POU4F3 en células tumorales con expresión de POU4F3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.