Partículas Lentivirales de Activación (h) Brn-3b/BRN3B/POU4F2: sc-400382-LAC

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) es un factor de transcripción con dominio homeobox tipo POU que controla programas de expresión génica específicos de tipo celular, con funciones destacadas en el desarrollo, la diferenciación y la supervivencia neuronal. Al unirse a motivos reguladores de ADN y coordinar redes transcripcionales, BRN3B influye en procesos como la guía axonal, la maduración sináptica y la transcripción en respuesta al estrés. En sistemas humanos, la actividad alterada de POU4F2 se utiliza para investigar mecanismos de regulación del neurodesarrollo y de especificación de linaje, y sus dianas aguas abajo se conectan con vías que gobiernan la apoptosis, el control del ciclo celular y la identidad neuronal. Estas características hacen de POU4F2 un nodo útil para estudiar la circuitería transcripcional en modelos neurales y perturbaciones relevantes para enfermedad que afectan el destino y la resiliencia neuronal.

Las partículas de activación lentiviral Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de POU4F2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción POU4F2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Brn-3b/BRN3B/POU4F2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo POU4F2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.