Brn-3a/BRN3A/POU4F1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400322-ACT

POU4F1 (Brn-3a/BRN3A) codifica um fator de transcrição com domínio POU que regula a especificação da linhagem neuronal, a sobrevivência e a diferenciaação terminal ao controlar programas gênicos envolvidos na orientação axonal, no crescimento de neuritos e na transcrição responsiva ao estresse. Está fortemente associado ao desenvolvimento de neurônios sensoriais e é frequentemente usado como marcador e impulsionador mecanístico em estudos de estados celulares neuronais derivados da crista neural e do sistema nervoso periférico. Brn-3a interage com redes transcricionais que modulam a apoptose e o controle do ciclo celular por meio da regulação downstream de alvos pró-sobrevivência e ligados à diferenciação. Atividade desregulada de POU4F1 foi relatada em contextos de disfunção do neurodesenvolvimento e de reprogramação transcricional oncogênica, reforçando sua utilidade para investigar a regulação gênica relevante para doenças.

Brn-3a/BRN3A/POU4F1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU4F1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Brn-3a/BRN3A/POU4F1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU4F1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU4F1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Brn-3a/BRN3A/POU4F1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU4F1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Brn-3a/BRN3A/POU4F1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Brn-3a/BRN3A/POU4F1 em células tumorais com expressão de POU4F1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.