Plásmido CRISPR de Activación (h) BRD9: sc-404933-ACT

BRD9 codifica la proteína 9 que contiene un bromodominio, un “lector” epigenético que reconoce marcas de acetil-lisina en las histonas y ayuda a coordinar la accesibilidad de la cromatina y la salida transcripcional. BRD9 funciona como subunidad de complejos no canónicos de remodelación de cromatina SWI/SNF (ncBAF), vinculando la acetilación de histonas con el posicionamiento de nucleosomas dependiente de ATP y la regulación de potenciadores. A través de estas actividades, BRD9 contribuye al control de programas de estado celular, incluidos la proliferación, la diferenciación y la transcripción en respuesta al estrés. La desregulación de la remodelación de cromatina asociada a BRD9 se ha implicado en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, en particular en cánceres, donde los circuitos transcripcionales alterados y la dependencia de linaje son temas de investigación comunes.

BRD9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BRD9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BRD9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BRD9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BRD9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BRD9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BRD9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BRD9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BRD9 en células tumorales con expresión de BRD9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.