Plásmido CRISPR de Activación (h) BRD4: sc-400519-ACT

El BRD4 humano codifica una proteína con bromodominio de la familia BET que se une a histonas acetiladas para regular la accesibilidad de la cromatina y la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II. BRD4 coordina la elongación transcripcional a través de P-TEFb y sostiene la actividad de potenciadores y superpotenciadores, moldeando programas vinculados a la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización inflamatoria, como NF-κB. Mediante estas funciones epigenéticas, BRD4 influye en la expresión génica específica de linaje y en las transiciones de estado celular. La actividad desregulada de BRD4 y la reconfiguración de potenciadores se estudian con frecuencia en oncología, biología mediada por el sistema inmunitario y control transcripcional virus–huésped, lo que lo convierte en un nodo central en la investigación de la transcripción y la cromatina.

BRD4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BRD4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BRD4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BRD4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BRD4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BRD4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BRD4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BRD4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BRD4 en células tumorales con expresión de BRD4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.