Plásmido Doble Nickase (h) BRCA2: sc-400700-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BRCA2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BRCA2 (h) y el plásmido de doble nickasa BRCA2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BRCA2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BRCA2 Anticuerpo (D-8): sc-518154
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BRCA2 | sc-400700-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BRCA2 | sc-400700-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRCA2 codifica un supresor tumoral nuclear que coordina la reparación de roturas de doble cadena del ADN de alta fidelidad mediante recombinación homóloga, a través de la regulación de la carga y estabilización de filamentos de RAD51 en los extremos de ADN resecados. Actúa en horquillas de replicación detenidas para proteger el ADN naciente y favorecer el reinicio de la horquilla, vinculando la actividad de BRCA2 con las respuestas al estrés replicativo y los puntos de control de la integridad genómica. La alteración de BRCA2 provoca inestabilidad cromosómica e hipersensibilidad al estrés que daña el ADN, lo que lo convierte en un nodo central en los estudios de las vías de reparación del ADN. Las alteraciones genéticas en BRCA2 se asocian fuertemente con la susceptibilidad a cáncer hereditario y esporádico, y el estado de BRCA2 se utiliza ampliamente en investigación para examinar la deficiencia de recombinación homóloga y la señalización del daño en el ADN.
BRCA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BRCA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BRCA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BRCA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BRCA2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.