Plásmido Doble Nickase (r) BRCA1: sc-437320-NIC
- Especies Diana: rat
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (r)BRCA1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BRCA1 (r) y el plásmido de doble nickasa BRCA1 (r2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a . Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BRCA1 Anticuerpo (287.17): sc-135732
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (r) BRCA1 | sc-437320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (r2) BRCA1 | sc-437320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRCA1 codifica un supresor tumoral multifuncional que coordina el mantenimiento del genoma al regular la reparación por recombinación homóloga de roturas de doble cadena del ADN, la protección de las horquillas de replicación y el control de los puntos de control del ciclo celular. En células de rata, BRCA1 actúa dentro del eje BRCA1–PALB2–BRCA2 para promover la carga de RAD51 y participa en vías de señalización del daño al ADN reguladas por las quinasas ATM/ATR. La pérdida o alteración de BRCA1 desorganiza procesos de reparación asociados a la cromatina, incrementa la inestabilidad genómica y sensibiliza a las células al estrés replicativo. Estos mecanismos convierten a BRCA1 en un nodo central para estudiar la elección de vías de reparación del ADN, la fidelidad mitótica y fenotipos de integridad genómica relevantes para el cáncer en modelos de roedores.
BRCA1 El plásmido de doble nicasa (r) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus en líneas celulares rat. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de . Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de . Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.