Plásmido Doble Nickase (m) BRCA1: sc-419362-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)BRCA1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BRCA1 (m) y el plásmido de doble nickasa BRCA1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Brca1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BRCA1 Anticuerpo (287.17): sc-135732
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) BRCA1 | sc-419362-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) BRCA1 | sc-419362-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Brca1 de ratón codifica BRCA1, un supresor tumoral multifuncional que coordina la reparación de alta fidelidad de roturas de doble cadena del ADN mediante recombinación homóloga y favorece la protección de la horquilla de replicación. BRCA1 actúa en redes de vigilancia genómica que incluyen la señalización de ATM/ATR y el control de puntos de control, y forma complejos funcionales con socios como BARD1, PALB2 y BRCA2 para regular la resección de extremos y la carga de RAD51. Más allá de la reparación del ADN, BRCA1 influye en la remodelación de la cromatina y en las respuestas transcripcionales al estrés genotóxico, modulando la progresión del ciclo celular y el mantenimiento de la estabilidad genómica. La alteración de Brca1 está estrechamente vinculada a un aumento del daño en el ADN, la inestabilidad cromosómica y fenotipos relevantes para la biología de la predisposición al cáncer en sistemas de mamíferos.
BRCA1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Brca1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Brca1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Brca1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Brca1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.