BRCA1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419362-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BRCA1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BRCA1 Double-Nickase-Plasmid (m) und BRCA1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Brca1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BRCA1: sc-135732
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BRCA1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419362-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRCA1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419362-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Brca1 kodiert für BRCA1, einen multifunktionalen Tumorsuppressor, der die hochpräzise Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen durch homologe Rekombination koordiniert und den Schutz von Replikationsgabeln fördert. BRCA1 wirkt in Netzwerken der Genomüberwachung, einschließlich ATM/ATR-Signalübertragung und Checkpoint-Kontrolle, und bildet funktionelle Komplexe mit Partnern wie BARD1, PALB2 und BRCA2, um die Endresektion und das Laden von RAD51 zu regulieren. Über die DNA-Reparatur hinaus beeinflusst BRCA1 das Chromatin-Remodeling und transkriptionelle Antworten auf genotoxischen Stress und prägt damit den Zellzyklusverlauf sowie die Aufrechterhaltung der genomischen Stabilität. Eine Störung von Brca1 ist in Säugersystemen eng mit erhöhter DNA-Schädigung, chromosomaler Instabilität und Phänotypen verbunden, die für die Biologie der Krebsprädisposition relevant sind.
BRCA1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Brca1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Brca1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Brca1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Brca1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.