Plásmido Doble Nickase (h) BRCA1: sc-400093-NIC

BRCA1 codifica una proteína supresora de tumores que actúa como un andamiaje central en la respuesta al daño del ADN, coordinando la reparación por recombinación homóloga, la protección de las horquillas de replicación y el control de los puntos de control del ciclo celular. BRCA1 forma complejos multiproteicos que regulan el procesamiento de las roturas de doble cadena y la señalización asociada a la cromatina, incluidas interacciones con PALB2/BRCA2 y redes de fosforilación mediadas por ATM/ATR. La alteración de BRCA1 compromete la estabilidad del genoma, aumentando la dependencia de vías de reparación propensas a errores y favoreciendo la acumulación de anomalías cromosómicas. La disfunción de BRCA1 está fuertemente vinculada a la predisposición hereditaria al cáncer de mama y de ovario, y se estudia ampliamente como un determinante de la capacidad de reparación del ADN y de la sensibilidad al estrés replicativo.

BRCA1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BRCA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BRCA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BRCA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BRCA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.