Plasmide CRISPR d'Activation (h) bradykinin B1 R: sc-401169-ACT

BDKRB1 code le récepteur B1 de la bradykinine (bradykinin B1 R), un récepteur couplé aux protéines G inductible, dont l’expression est augmentée par les cytokines inflammatoires et les lésions tissulaires. Après liaison de peptides de bradykinine des-Arg, le récepteur B1 de la bradykinine signale via Gαq/PLCβ, ce qui augmente le Ca²⁺ intracellulaire et active la PKC ; il peut également mobiliser les voies MAPK et NF-κB afin de moduler la production de chimiokines, la perméabilité vasculaire et le recrutement/trafic des leucocytes. Son expression est généralement faible dans les tissus en homéostasie, mais augmente dans l’endothélium activé, le muscle lisse et les cellules immunitaires, reliant BDKRB1 aux programmes inflammatoires et nociceptifs. Une dérégulation de la signalisation de BDKRB1 a été associée à l’inflammation chronique, à la biologie de la douleur neuropathique, à des dysfonctionnements vasculaires et à des processus de remodelage tissulaire, dans des contextes pertinents pour la recherche cardiométabolique et neuro-inflammatoire.

bradykinin B1 R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BDKRB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

bradykinin B1 R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BDKRB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BDKRB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de bradykinin B1 R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BDKRB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de bradykinin B1 R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie bradykinin B1 R dans les cellules tumorales présentant une expression de BDKRB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.