Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
brachyury Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423247
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- brachyury El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico brachyury, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: brachyury Anticuerpo (D-10): sc-166962
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
brachyury Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423247 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen **T** del ratón codifica **Brachyury**, un factor de transcripción de la familia **T-box** esencial para la formación del mesodermo, la progresión de la línea primitiva y el desarrollo del eje corporal posterior durante la embriogénesis. Brachyury regula programas de especificación de linaje y coordina redes transcripcionales que controlan decisiones de destino celular, el patrón tisular y movimientos morfogenéticos, integrándose con señales como las vías **WNT**, **FGF** y **TGF-β/SMAD**. La actividad desregulada de Brachyury se ha vinculado con una diferenciación mesenquimal aberrante y con la expresión génica asociada a la transición epitelio–mesénquima, lo que respalda su relevancia en defectos del desarrollo y en la reprogramación transcripcional asociada a enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO brachyury (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen T en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del T junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de T tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína brachyury.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en T para la investigación de la señalización de brachyury, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de T críticos para la función de brachyury
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de T para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido brachyury CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido brachyury CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus T. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR brachyury (m) y el plásmido HDR brachyury (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología T para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana T definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.