BR-cadherin Double Nickase Plasmid (h): sc-401987-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BR-cadherin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BR-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h) und BR-cadherin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDH12 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BR-cadherin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401987-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BR-cadherin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401987-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDH12 kodiert BR-Cadherin, ein kalziumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül aus der Familie der klassischen Cadherine, das durch homophile Interaktionen und die Kopplung an Catenine die Gewebearchitektur unterstützt. Durch die Verbindung von Adherens Junctions mit dem Aktinzytoskelett beeinflusst BR-Cadherin kontaktabhängige Signalübertragung, zelluläre Polarität und koordinierte Migration während der Entwicklung und des Gewebeumbaus. Die Expression von CDH12 wurde mit der Organisation neuronaler und epithelialer Gewebe in Verbindung gebracht, und eine Fehlregulation der cadherinvermittelten Adhäsion ist in der Krankheitsbiologie allgemein relevant für invasives Verhalten und veränderte Differenzierungsprogramme. Als Regulator an Zellkontakten bietet BR-Cadherin einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie der Adhäsionszustand intrazelluläre Signalwege und morphogenetische Prozesse umprogrammiert.
BR-cadherin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDH12-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDH12 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDH12-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDH12-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.