Plásmido Doble Nickase (h) BORIS: sc-403313-NIC

CTCFL codifica BORIS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), un regulador transcripcional cáncer‑testículo relacionado con CTCF que se une al ADN de manera específica de secuencia para influir en la organización de la cromatina y en programas de expresión génica. BORIS participa en la regulación epigenética, incluido el control del improntado y la modulación de la accesibilidad de la cromatina, y puede interactuar con procesos como el aislamiento transcripcional, la comunicación potenciador–promotor y redes transcripcionales asociadas a la línea germinal. Se ha descrito una expresión aberrante de BORIS en diversos contextos tumorales y con frecuencia se estudia por sus vínculos con estados epigenéticos desregulados, circuitería transcripcional alterada y fenotipos de estabilidad del genoma. Como gen humano con expresión normal restringida a tejidos específicos, CTCFL es un modelo útil para investigar mecanismos de control transcripcional dependiente de la cromatina y de reprogramación oncogénica.

BORIS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTCFL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTCFL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTCFL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTCFL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.