Bob 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400771-ACT

POU2AF1（Bob 1/OBF-1）は、B細胞に特異的に発現する転写共活性化因子をコードしており、OCT1（POU2F1）およびOCT2（POU2F2）と協調して、オクタマー配列依存的な転写を増強します。Bob 1は、系譜決定的な転写因子と連動しながらプロモーターおよびエンハンサーの出力を調節することで、胚中心の形成、免疫グロブリン遺伝子の制御、ならびにより広範なB細胞活性化プログラムを支えます。これらのネットワークを介してPOU2AF1は、成熟B細胞に特徴的な分化状態やシグナル伝達状態に寄与し、抗原刺激に基づく応答や形質細胞への分化にも影響します。POU2AF1の発現異常と、それに伴う転写回路は、B細胞性悪性腫瘍や免疫機能障害の文脈で、変化した遺伝子制御プログラムを理解するためにしばしば研究対象となっています。

Bob 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POU2AF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Bob 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POU2AF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOU2AF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Bob 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOU2AF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBob 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOU2AF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBob 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。