Partículas Lentivirales de Activación (h) BMPR-II: sc-400895-LAC

BMPR2 codifica el receptor de proteína morfogenética ósea tipo II (BMPR-II), un receptor quinasa de serina/treonina de la superfamilia TGF-β/BMP que transmite señales desde ligandos BMP extracelulares hacia la señalización intracelular de SMAD1/5/8. Tras la unión del ligando, BMPR-II se asocia con receptores BMP de tipo I para impulsar cascadas de fosforilación que regulan programas de transcripción que controlan la homeostasis vascular, el comportamiento de las células del músculo liso y la formación de patrones durante el desarrollo. La señalización de BMPR2 también se interconecta con vías no canónicas, incluidas las redes de MAPK y de GTPasas Rho, influyendo en la dinámica del citoesqueleto y la migración celular. La actividad o expresión desregulada de BMPR2 está fuertemente vinculada a la biología de la hipertensión arterial pulmonar y a fenotipos más amplios de remodelado vascular, por lo que es una diana ampliamente utilizada en estudios mecanísticos de la regulación de la vía BMP.

Las partículas de activación lentiviral BMPR-II (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BMPR2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BMPR-II (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BMPR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BMPR-II. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BMPR2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.