Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMPR-II: sc-400895-ACT

BMPR2 code pour le récepteur de type II des protéines morphogénétiques osseuses (BMPR‑II), un récepteur kinase sérine/thréonine qui se lie aux ligands BMP et forme des complexes hétéromériques avec des récepteurs de type I afin d’initier la signalisation canonique SMAD1/5/8 ainsi que des voies non canoniques impliquant les MAPK et le cytosquelette. Par l’intermédiaire de ces cascades, BMPR‑II régule des décisions de destinée cellulaire, notamment la prolifération, la différenciation, la migration et l’apoptose, avec des rôles majeurs dans l’homéostasie vasculaire et l’organisation du développement. Une expression ou une signalisation altérée de BMPR2 perturbe l’équilibre du réseau BMP/TGF‑β et est fréquemment étudiée dans des contextes de dysfonction endothéliale, de remodelage anormal du muscle lisse et de défauts congénitaux de signalisation. BMPR‑II constitue donc un nœud clé pour les études mécanistiques des programmes transcriptionnels induits par les BMP et du dialogue entre voies de signalisation dans les cellules humaines.

BMPR-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMPR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMPR-II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMPR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMPR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMPR-II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMPR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMPR-II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMPR-II dans les cellules tumorales présentant une expression de BMPR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.