Plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-2 (h): sc-400514

Présentation

BMP2 code la protéine morphogénétique osseuse 2 (BMP‑2), un ligand sécrété de la superfamille du TGF‑β qui signale principalement via des récepteurs de type I/II à activité sérine‑thréonine kinase, afin d’activer SMAD1/5/8 et d’interagir avec les voies MAPK. La BMP‑2 régule la différenciation ostéogénique et chondrogénique, le remodelage de la matrice extracellulaire et la mise en place des patrons du développement, et elle oriente les décisions de destinée cellulaire au sein des lignages mésenchymateux. Une dérégulation de la signalisation BMP2 a été associée à une ossification aberrante, à des malformations squelettiques et à des signaux anormaux du microenvironnement tumoral influençant la prolifération, la migration et les programmes épithélio‑mésenchymateux. BMP2 est donc largement étudié en biologie osseuse, dans des modèles de régénération et dans des analyses de crosstalk impliquant la signalisation TGF‑β/BMP.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BMP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BMP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BMP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BMP-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BMP2 pour l'étude de la signalisation de BMP-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BMP2 essentiels à la fonction de BMP-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BMP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BMP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BMP-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BMP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BMP-2 plasmide HDR (h) et le BMP-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BMP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BMP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.