BMAL2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-435462-ACT

Arntl2 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-PAS-Transkriptionsfaktor BMAL2, einen zentralen Regulator zirkadianer Transkriptionsprogramme, der mit CLOCK/NPAS2 heterodimerisiert, um E-Box-abhängige Genexpression anzutreiben. In Mauszel len trägt BMAL2 über uhrgesteuerte Netzwerke zur rhythmischen Kontrolle von Stoffwechsel, mitochondrialer Funktion, DNA-Schadensantworten und Immun-Signalgebung bei. Durch Arntl2 vermittelte zeitliche Signale greifen in Signalwege wie MAPK- und NF-κB-Signaling ein und prägen unter Stress Zellzustandsübergänge. Eine dysregulierte ARNTL2/BMAL2-Aktivität wurde mit veränderter zirkadianer Homöostase in Verbindung gebracht und in Kontexten wie Entzündung, metabolischer Dysfunktion und tumorassoziierten Phänotypen untersucht.

BMAL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Arntl2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BMAL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Arntl2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Arntl2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BMAL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Arntl2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BMAL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BMAL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Arntl2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.