BMAL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400808-ACT

ARNTL（BMAL1）は、基本ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）PAS型の中核転写因子で、CLOCK/NPAS2とヘテロ二量体を形成し、E-box配列を介して概日リズム性の遺伝子発現プログラムを駆動します。この複合体は、PERおよびCRYによる抑制因子と連動した転写フィードバックループを調整しながら、代謝、ミトコンドリア機能、レドックスバランス、DNA損傷応答、免疫シグナル伝達の日内振動を制御します。ヒト生物学においてBMAL1活性の変化は、概日リズムの破綻と関連し、その下流で代謝恒常性、炎症経路、神経行動学的表現型、細胞のストレス耐性に影響を及ぼすことが示されています。BMAL1は低酸素応答や核内受容体ネットワークとも交差するため、in vitroで転写の時間的制御やシステムレベルの生理機能を研究する上で有用な結節点となります。

BMAL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARNTLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BMAL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARNTL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARNTL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BMAL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARNTL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBMAL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARNTL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBMAL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。