Plásmido CRISPR de Activación (h) BLVRB: sc-405988-ACT

La BLVRB (biliverdina reductasa B) humana es una oxidorreductasa citosólica dependiente de NAD(P)H que cataliza la reducción de biliverdina IXβ a bilirrubina, contribuyendo al catabolismo del hemo y a la homeostasis redox celular. Al modular los niveles de biliverdina y bilirrubina, la BLVRB influye en la capacidad antioxidante, en la amortiguación de especies reactivas de oxígeno y en vías de señalización posteriores sensibles al estrés, vinculadas a la adaptación metabólica y la inflamación. La actividad de BLVRB también se asocia con la fisiología eritroide y el recambio de la hemoglobina, conectándola con rutas que regulan el manejo del hierro y el control del daño oxidativo. La desregulación del metabolismo del hemo y el desequilibrio redox están implicados en diversos trastornos hematológicos y metabólicos, lo que convierte a BLVRB en un nodo útil para estudios mecanísticos de respuestas al estrés oxidativo y del metabolismo de pigmentos.

BLVRB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BLVRB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BLVRB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BLVRB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BLVRB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BLVRB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BLVRB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BLVRB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BLVRB en células tumorales con expresión de BLVRB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.