Plasmide CRISPR/Cas9 KO BLOS2 (h): sc-406776

Présentation

BLOC1S2 code pour BLOS2, une sous-unité centrale du complexe BLOC-1 (Biogenesis of Lysosome-related Organelles Complex-1), qui coordonne le trafic endosomal et le tri du cargo. Grâce aux interactions de BLOC-1 avec les complexes de protéines adaptatrices et la machinerie de transport du cytosquelette, BLOS2 contribue à l’acheminement des protéines membranaires vers les endosomes, les lysosomes et les organites apparentés aux lysosomes, influençant la maturation vésiculaire et l’homéostasie cellulaire. La perturbation des composants de BLOC-1 a été associée à des modifications de la croissance des neurites, de la dynamique des vésicules synaptiques et à des défauts des voies de pigmentation dépendant d’organites spécialisés tels que les mélanosomes. Ainsi, BLOC1S2 est étudié dans le cadre des troubles du transport intracellulaire et en neurobiologie, où l’altération de la voie endolysosomale peut affecter la signalisation et la protéostase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BLOS2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BLOC1S2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BLOC1S2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BLOC1S2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BLOS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BLOC1S2 pour l'étude de la signalisation de BLOS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BLOC1S2 essentiels à la fonction de BLOS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BLOC1S2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BLOS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BLOS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BLOC1S2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BLOS2 plasmide HDR (h) et le BLOS2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BLOC1S2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BLOC1S2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.