Plásmido Doble Nickase (h) BLCAM: sc-401451-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD22 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD22 (h) y el plásmido de doble nickasa CD22 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD22. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD22 Anticuerpo (D-5): sc-271579
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BLCAM | sc-401451-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD22 | sc-401451-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El CD22 humano, también conocido como BLCAM, es una lectina tipo inmunoglobulina que se une al ácido siálico y cuya expresión está restringida a las células B, donde actúa como correceptor inhibidor del receptor del antígeno de las células B (BCR). Tras la activación del BCR, CD22 se fosforila y recluta a la fosfatasa SHP-1, atenuando la señalización de quinasas aguas abajo y modulando el flujo de calcio, la activación de MAPK y las vías asociadas a PI3K que determinan la activación y la tolerancia de las células B. Mediante su función en el control de los umbrales de señalización y en la promoción de la homeostasis inmunitaria, CD22 contribuye a regular la capacidad de respuesta frente a antígenos, las señales de supervivencia y el mantenimiento de la autotolerancia periférica de las células B. La desregulación de la señalización o de la expresión de CD22 se ha asociado con estados anómalos de activación de células B relevantes para la autoinmunidad y la biología de neoplasias derivadas de células B, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del control de la vía del BCR.
CD22 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD22 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD22. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD22. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD22 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.