Plásmido CRISPR de Activación (h) BLCAM: sc-401451-ACT

CD22 (BLCAM) es una lectina tipo inmunoglobulina de unión al ácido siálico, restringida a las células B, que actúa como correceptor inhibidor del receptor de células B (BCR), ajustando los umbrales de señalización inducidos por antígeno. A través de motivos inhibitorios basados en tirosina de receptores inmunitarios (ITIM), recluta fosfatasas como SHP-1/SHIP para modular la actividad de quinasas proximales y vías posteriores, incluidas PI3K/AKT, MAPK y el flujo de calcio, configurando así la activación, la supervivencia y la tolerancia de las células B. CD22 también contribuye a la adhesión y al tráfico de las células B mediante interacciones dependientes de glicanos en la superficie celular. La expresión o señalización desregulada de CD22 se ha asociado con una homeostasis inmunitaria alterada y se estudia con frecuencia en el contexto de neoplasias de células B y fenotipos de células B relevantes para la autoinmunidad.

CD22 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD22 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD22 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD22 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD22, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD22. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD22 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD22 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD22 en células tumorales con expresión de CD22 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.