Plasmide Double Nickase (h) BimEL: sc-400515-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BimEL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BimEL Double Nickase (h) et le plasmide BimEL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BCL2L11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BimEL | sc-400515-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BimEL | sc-400515-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L11 code la protéine pro-apoptotique de type BH3-only Bim, et l’isoforme Bim_EL est un variant d’épissage largement exprimé qui intègre des signaux de stress cellulaire afin d’initier la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale. Bim_EL favorise l’apoptose intrinsèque en neutralisant des membres anti-apoptotiques de la famille BCL-2 et en facilitant l’activation de BAX/BAK, reliant le retrait des facteurs de croissance, le stress du réticulum endoplasmique (RE) et des signaux liés au cytosquelette à l’activation des caspases. Son activité est régulée par le contrôle transcriptionnel (p. ex. FOXO), la phosphorylation post-traductionnelle (p. ex. un turn-over dépendant de MAPK/ERK) et sa séquestration au réseau de microtubules, ce qui place Bim_EL à l’interface des voies de survie et de mort cellulaires. Une dérégulation de l’amorçage apoptotique médié par BCL2L11 a été impliquée dans la survie oncogénique, des défauts d’homéostasie immunitaire et des réponses modifiées au stress cellulaire, faisant de ce gène un nœud clé de la recherche sur l’apoptose et le destin cellulaire.
BimEL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BCL2L11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BCL2L11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BCL2L11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BCL2L11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.