Partículas Lentivirales de Activación (m) BIGM103: sc-426620-LAC

Slc39a8 codifica el transportador de iones metálicos ZIP8, que media la captación celular de cationes divalentes como el manganeso y el zinc y ayuda a mantener la homeostasis intracelular de metales. A través de la regulación de la disponibilidad de manganeso, ZIP8 puede influir en la actividad de enzimas dependientes de Mn, incluidas las vías de glicosilación y procesos metabólicos y redox más amplios que modelan las respuestas celulares al estrés. La función alterada de SLC39A8/ZIP8 se ha relacionado en la literatura con la señalización inflamatoria, fenotipos del neurodesarrollo y rasgos metabólicos, en consonancia con el papel central del transporte de micronutrientes en la fisiología tisular. En sistemas de ratón, Slc39a8 es por tanto un nodo útil para estudiar la regulación dependiente de metales de programas de señalización y expresión génica relevantes para mecanismos asociados a enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral BIGM103 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Slc39a8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BIGM103 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Slc39a8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BIGM103. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Slc39a8 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.