BIGM103 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426620

Descripción general

Slc39a8 codifica un transportador de iones metálicos de la familia ZIP (BIGM103) que media principalmente la captación celular de cationes divalentes, con un marcado énfasis en la homeostasis del manganeso. Al controlar la disponibilidad intracelular de Mn, SLC39A8 influye en la actividad de enzimas dependientes de Mn y respalda procesos como la glicosilación, el metabolismo mitocondrial y el equilibrio redox. Las alteraciones en la función de SLC39A8 se han vinculado con un manejo desregulado de metales y con efectos posteriores sobre la señalización inflamatoria y las vías metabólicas, lo que la hace relevante para estudiar interacciones nutriente–gen y fenotipos celulares sensibles al estrés. En sistemas murinos, Slc39a8 se investiga con frecuencia en el contexto de la biología de transportadores, las respuestas inmunitarias innatas y rasgos relacionados con el metabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BIGM103 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc39a8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc39a8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc39a8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BIGM103.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc39a8 para la investigación de la señalización de BIGM103, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc39a8 críticos para la función de BIGM103
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc39a8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BIGM103 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido BIGM103 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc39a8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BIGM103 (m) y el plásmido HDR BIGM103 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc39a8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc39a8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.