BIGM103 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426620

Übersicht

Slc39a8 kodiert einen Metallionentransporter der ZIP-Familie (BIGM103), der vor allem die zelluläre Aufnahme zweiwertiger Kationen vermittelt, mit einem besonderen Schwerpunkt auf der Manganhomöostase. Durch die Kontrolle der intrazellulären Mn-Verfügbarkeit beeinflusst SLC39A8 die Aktivität Mn-abhängiger Enzyme und unterstützt Prozesse wie Glykosylierung, mitochondrialen Stoffwechsel und Redox-Gleichgewicht. Eine veränderte SLC39A8-Funktion wurde mit einer dysregulierten Metallverarbeitung und nachgeschalteten Effekten auf inflammatorische Signalwege und Stoffwechselpfade in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung von Nährstoff–Gen-Interaktionen und stressresponsiven zellulären Phänotypen relevant macht. In Mausmodellen wird Slc39a8 häufig im Kontext von Transporterbiologie, angeborenen Immunantworten und stoffwechselbezogenen Merkmalen untersucht.

Das BIGM103 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc39a8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc39a8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc39a8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BIGM103-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc39a8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BIGM103-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc39a8-Exone abzielen, die für die BIGM103-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc39a8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BIGM103 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BIGM103 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc39a8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BIGM103 HDR-Plasmid (m) und BIGM103 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc39a8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc39a8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.