Plásmido CRISPR de Activación (m) BIGM103: sc-426620-ACT

Slc39a8 codifica un transportador de iones metálicos de la familia ZIP implicado en la captación celular de cationes divalentes, en particular manganeso, lo que sustenta la actividad de enzimas dependientes de metales y la homeostasis redox en tejidos de ratón. Al modular la disponibilidad intracelular de manganeso, BIGM103 influye en procesos como la glicosilación, la función mitocondrial y las vías de señalización inflamatoria que dependen de metaloenzimas y de un equilibrio adecuado de cofactores. La alteración de la expresión de Slc39a8 se ha asociado con respuestas inmunitarias modificadas y fenotipos metabólicos, lo que lo hace relevante para estudiar cómo el transporte de micronutrientes se interrelaciona con la señalización celular y la fisiología sistémica. Este gen se investiga con frecuencia en modelos de desregulación de la homeostasis metálica y de biología de rasgos complejos, donde el suministro de cofactores dependiente de transportadores puede reconfigurar la actividad de vías aguas abajo.

BIGM103 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Slc39a8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BIGM103 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Slc39a8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Slc39a8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BIGM103. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Slc39a8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BIGM103 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BIGM103 en células tumorales con expresión de Slc39a8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.