BICD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405525

Übersicht

BICD2 (bicaudal D homolog 2) kodiert einen Dynein–Dynactin-Adapter, der Fracht an den mikrotubuli-basierten, zum Minusende gerichteten Transport koppelt und so den Langstreckentransport in polarisierten Zellen wie Neuronen unterstützt. Durch die Verknüpfung von Vesikeln, Endosomen und Organellen mit dem zytoplasmatischen Dynein trägt BICD2 zur Organisation des Golgi-Apparats, zur Positionierung von Endosomen, zur Dynamik der Kernhülle sowie zu zellzyklusbezogenen Prozessen einschließlich der Spindelausrichtung bei. Der BICD2-abhängige Transport überschneidet sich mit Signalwegen, die die axonale Homöostase und den Membrantransport steuern, wobei eine präzise Frachtzustellung für die neuronale Aufrechterhaltung erforderlich ist. Genetische Variationen in BICD2 wurden mit neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Ziel für die Erforschung der Motoneuron-Biologie und von Defekten des intrazellulären Transports macht.

Das BICD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BICD2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BICD2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BICD2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BICD2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BICD2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BICD2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BICD2-Exone abzielen, die für die BICD2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BICD2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BICD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BICD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BICD2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BICD2 HDR-Plasmid (h) und BICD2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BICD2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BICD2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.