BGT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420468

Übersicht

Slc6a12 kodiert den Betaine/GABA-Transporter BGT-1 (SLC6A12), ein Na⁺/Cl⁻-abhängiges Mitglied der SLC6-Familie von Neurotransmitter-Transportern, das die zelluläre Aufnahme des Osmolyten Betain vermittelt und in bestimmten Kontexten auch GABA transportieren kann. BGT-1 trägt zur Anpassung an osmotischen Stress und zur Regulation des Zellvolumens bei, indem es die intrazelluläre Anreicherung organischer Osmolyte unterstützt und so Membrantransport mit osmoprotektiven Programmen und metabolischer Homöostase verknüpft. In Mausgeweben wurde die Expression von Slc6a12 in Nierenepithelien sowie im Nervensystem untersucht, wo eine veränderte Transporteraktivität den inhibitorischen Tonus und stressresponsive Signalwege beeinflussen kann. Eine Fehlregulation der Osmolythandhabung und des GABAergen Gleichgewichts ist relevant für Modelle osmotischer Nierenschädigung, Neuroinflammation und Krampfanfälligkeit, wodurch Slc6a12 ein nützliches Ziel für mechanistische Pathway-Studien darstellt.

Das BGT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc6a12-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc6a12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc6a12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BGT-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc6a12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BGT-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc6a12-Exone abzielen, die für die BGT-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc6a12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BGT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BGT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc6a12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BGT-1 HDR-Plasmid (m) und BGT-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc6a12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc6a12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.