Plásmido Doble Nickase (m) beta Synuclein: sc-430508-NIC

Sncb codifica la beta-sinucleína, una proteína neuronal presináptica que se asocia con las vesículas sinápticas y modula la liberación de neurotransmisores y la plasticidad sináptica. En el cerebro de ratón, la beta-sinucleína participa en vías que regulan el tráfico de vesículas, la curvatura de la membrana y la proteostasis, y puede influir en el comportamiento de agregación de otros miembros de la familia de las sinucleínas. La alteración de la homeostasis de las sinucleínas se ha relacionado con mecanismos neurodegenerativos que implican mal plegamiento proteico, defectos en el transporte axonal y disfunción sináptica. Por ello, Sncb se utiliza ampliamente como herramienta molecular para analizar el mantenimiento de la sinapsis, las respuestas neuronales al estrés y las interacciones de la red de sinucleínas in vivo y en neuronas cultivadas.

beta Synuclein El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sncb en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sncb. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sncb. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sncb alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.