Plásmido Doble Nickase (m) beta-catenin: sc-419477-NIC

El gen murino Ctnnb1 codifica la beta-catenina, una proteína multifuncional con repeticiones armadillo que acopla las uniones adherentes dependientes de cadherinas al citoesqueleto de actina y regula la adhesión célula–célula y la arquitectura tisular. En la señalización canónica de Wnt, la beta-catenina estabilizada se acumula en el citoplasma y se transloca al núcleo para asociarse con factores de transcripción TCF/LEF, coordinando programas que controlan la proliferación, la diferenciación y el mantenimiento de células madre. La actividad de la beta-catenina está modulada por el complejo de destrucción (incluidos APC, AXIN y GSK3), integrando señales de pistas del desarrollo y de vías sensibles al estrés. La desregulación de la señalización de beta-catenina o de sus funciones de adhesión se ha implicado en la transformación oncogénica, defectos del desarrollo y patologías inflamatorias, lo que convierte a Ctnnb1 en un nodo central para estudios mecanísticos.

beta-catenin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ctnnb1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ctnnb1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ctnnb1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ctnnb1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.