beta-catenin Double Nickase Plasmid (h): sc-400038-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das beta-catenin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- beta-catenin Double-Nickase-Plasmid (h) und beta-catenin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTNNB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: beta-catenin: sc-7963
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
beta-catenin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400038-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
beta-catenin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400038-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNNB1 kodiert das humane β‑Catenin, ein multifunktionales Protein, das Cadherin-basierte Adhärenskontakte mit dem Aktin-Zytoskelett verbindet und als transkriptioneller Ko‑Regulator in der kanonischen Wnt-Signalgebung wirkt. In Abwesenheit von Wnt-Liganden wird β‑Catenin durch den APC–AXIN–GSK3-Destruktionskomplex phosphoryliert und dem proteasomalen Abbau zugeführt, während eine Aktivierung des Signalwegs β‑Catenin stabilisiert und die nukleäre Koaktivierung von TCF/LEF-abhängigen Genprogrammen fördert, die Proliferation, Differenzierung und die Aufrechterhaltung von Stammzellen steuern. Eine abnorme CTNNB1-Aktivität oder -Stabilisierung stört Entscheidungen zur Zellschicksalsfestlegung, die epitheliale Integrität und die Entwicklungs-Patternbildung und ist häufig an onkogener Signalgebung sowie gewebespezifischen Dysplasien beteiligt. Als zentraler Effektor, der Zelladhäsion und Wnt-Signalweg-Outputs integriert, wird CTNNB1 in Kontexten wie EMT, Kontaktinhibition, Organoidbiologie und Signalweg-Crosstalk mit Hippo- und Wachstumsfaktor-Signalgebung umfassend untersucht.
beta-catenin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTNNB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTNNB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTNNB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTNNB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.