Plásmido CRISPR de Activación (h) beta Arrestin 1: sc-400642-ACT

ARRB1 codifica la beta‑arrestina 1, un adaptador multifuncional que regula la desensibilización de los receptores acoplados a proteína G (GPCR), la internalización del receptor y su tráfico tras la estimulación por un agonista. Además de terminar la señalización mediada por proteínas G, la beta‑arrestina 1 actúa como andamio de complejos de señalización que modulan las salidas de las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y NF‑κB, configurando respuestas transcripcionales dependientes del contexto y la dinámica del citoesqueleto. A través de estas funciones, ARRB1 influye en procesos como la quimiotaxis, la endocitosis y la integración de señales aguas abajo de diversos receptores. La desregulación de la señalización mediada por arrestinas se ha asociado con estados alterados de señalización proliferativa e inflamatoria implicados en la biología del cáncer, la regulación cardiometabólica y circuitos de GPCR relevantes para trastornos neuropsiquiátricos.

beta Arrestin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARRB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

beta Arrestin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARRB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARRB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de beta Arrestin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARRB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de beta Arrestin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía beta Arrestin 1 en células tumorales con expresión de ARRB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.