Plásmido Doble Nickase (h) beta Actin: sc-400000-NIC

ACTB codifica la beta-actina humana, una proteína del citoesqueleto altamente conservada que polimeriza en microfilamentos para sostener la forma celular, la integridad mecánica y el transporte intracelular. La dinámica de la beta-actina se coordina con proteínas de unión a actina en vías que controlan la adhesión celular, la migración, la citocinesis y la endocitosis, y se acopla a redes de señalización como la regulación del remodelado de actina por GTPasas de la familia Rho. Dado que la arquitectura de actina influye en la organización de la cromatina y la mecanotransducción, ACTB se utiliza con frecuencia como referencia de la homeostasis celular, además de servir como un nodo funcional en estudios de motilidad y respuestas al estrés celular. Las alteraciones en la regulación de la actina y en los procesos citoesqueléticos asociados a ACTB se han implicado en diversos fenotipos relevantes para enfermedad, incluidos cambios en la invasión, defectos del desarrollo y patologías del citoesqueleto.

beta Actin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACTB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACTB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACTB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACTB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.