Plasmide CRISPR d'Activation (m) beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3: sc-419239-ACT

Atp1b3 code la sous-unité β3 de la Na⁺/K⁺‑ATPase, une ATPase de type P hétéromérique qui maintient des gradients transmembranaires de Na⁺ et de K⁺ essentiels au potentiel de membrane au repos, à l’équilibre osmotique et au transport actif secondaire. En soutenant l’homéostasie ionique, ATP1B3 influence des processus tels que la régulation du volume cellulaire, le transport épithélial et l’excitabilité, et peut moduler des réseaux de signalisation couplés au potentiel de membrane et à l’activité de kinases dépendantes des ions. La sous-unité β contribue également à l’assemblage correct, au trafic intracellulaire et à la stabilité membranaire du complexe pompe, façonnant ainsi la demande énergétique cellulaire via un transport ionique dépendant de l’ATP. Une fonction dérégulée de la Na⁺/K⁺‑ATPase est pertinente dans des modèles de dysfonctionnement neurologique, de physiologie cardiovasculaire et rénale, ainsi que de phénotypes associés à l’inflammation, ce qui fait d’Atp1b3 un nœud utile pour des études mécanistiques dans des systèmes murins.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Atp1b3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Atp1b3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Atp1b3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Atp1b3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Atp1b3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.