Plásmido Doble Nickase (h) beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1: sc-401093-NIC

ATP1B1 codifica la subunidad beta 1 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, un complejo ATPasa de tipo P de la membrana plasmática que mantiene los gradientes de sodio y potasio necesarios para el potencial de membrana, el equilibrio osmótico y el transporte activo secundario. Al sostener la homeostasis electroquímica, ATP1B1 influye en la polaridad epitelial, la regulación del volumen celular y la señalización vinculada a la excitabilidad, y puede modular procesos relacionados con la adhesión mediante efectos sobre la organización de la membrana. La alteración de la expresión o la estequiometría de las subunidades de la Na⁺/K⁺-ATPasa se ha asociado con un transporte iónico desregulado en la fisiología renal y cardiovascular, y se ha estudiado en el contexto del metabolismo de células tumorales y las respuestas al estrés. En consecuencia, ATP1B1 se investiga con frecuencia en vías que conectan la homeostasis iónica con la proliferación, la función de barrera y la transducción de señales.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP1B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP1B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP1B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP1B1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.